细菌总数(95MPN/mL)-栖沙盐水孢菌SHMCCD58390=ATCCBAA-917=BCRC16821=CIP108942=DSM44819=NBRC105043-大肠埃希氏菌,T7噬菌体宿主菌
dCTP(脱氧胞苷三磷酸)是DNA合成中的关键核苷酸之一,广泛应用于多种分子生物学实验
在分子生物学实验中,核酸电泳是检测核酸片段大小和纯度的关键技术之一。3×甲酰胺凝胶上样缓冲液作为一种高效的辅助试剂,为核酸电泳提供了重要的支持。组成成分3×甲酰胺凝胶上样缓冲液的主要成分包括:甲酰胺(Formamide):高浓度的甲酰胺能够有效变性核酸,使其保持单链状态,避免核酸在电泳过程中形成二级结构,从而实现更准确的分子量测定。二甲苯青(Xylene Cyanol FF) 和 溴酚(Bromophenol Blue):这两种染料作为示踪剂,可帮助观察电泳的进程。二甲苯青迁移速度较慢,适用于较大片段的示踪;溴酚蓝迁移速度较快,适用于较小片段的示踪。EDTA(乙二胺四乙酸):螯合二价金属离子,防止核酸被核酸酶降解,同时维持电泳过程中的缓冲环境。使用方法样品混合:将核酸样品与3×甲酰胺凝胶上样缓冲液按体积比2:1混合,例如,5 μL核酸样品加入2.5 μL缓冲液。变性处理:混合后的样品在70℃加热5-10分钟,使核酸充分变性。加热后立即置于冰上冷却,以防止核酸重新折叠。电泳上样:将处理后的样品加入凝胶的加样孔中,进行电泳。
它具有与 EB 相当的灵敏度,能够检测到低浓度的核酸分子,同时避免了 EB 的高毒性和潜在致癌性。
T5核酸外切酶(T5 Exonuclease)是一种沿5'→3'方向降解DNA的核酸外切酶,能够从DNA的5'末端或线性/环状双链DNA的缺口(gap)或切刻(nick)处起始消化。它对超螺旋双链DNA无作用,并且具有单链DNA核酸内切酶活性。 特性与应用 高效降解:T5核酸外切酶能够高效降解线性单链和双链DNA,以及切刻的质粒DNA。 无缝克隆:在无缝克隆技术中,T5核酸外切酶用于从DNA片段的5'端切割一条链,产生3'突出末端,促进互补片段的退火配对,进而通过DNA聚合酶填补缺口,最后由DNA连接酶修复缺刻,形成完整的环状质粒。 Gibson组装:T5核酸外切酶在Gibson组装中发挥关键作用,通过从DNA片段的5'末端开始消化,产生互补的单链3'末端,促进片段退火和连接。 去除污染:该酶可用于去除碱裂解质粒提取过程中产生的变性DNA,提高DNA克隆效率。 使用方法 储存条件:T5核酸外切酶通常保存于-20℃,有效期可达3年。 反应条件:在37℃下反应30分钟,加入至少11 mM EDTA或含有SDS的DNA Loading Buffer终止反应。
6×DNA Loading Buffer是一种六倍浓缩的上样缓冲液,主要用于DNA凝胶电泳。
粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF,Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor)是一种重要的造血生长因子,广泛参与细胞增殖、分化和免疫调节。GM-CSF在人体的免疫防御和炎症反应中发挥着关键作用。特别是通过毕赤酵母(Pichia pastoris)表达的人源GM-CSF(GM-CSF, Human, P. pastoris-expressed),因其高效性和稳定性,成为生物医学研究和临床应用中的重要工具。 GM-CSF的结构与功能 GM-CSF是一种单链多肽,由127个氨基酸组成,具有高度的保守性和生物活性。它通过与细胞表面的GM-CSF受体结合,激活一系列细胞内信号通路,如JAK-STAT、PI3K-Akt和MAPK通路,从而促进粒细胞和巨噬细胞的增殖和分化。GM-CSF还能够调节免疫细胞的存活和功能,增强其吞噬和杀菌能力。 毕赤酵母表达的优势 毕赤酵母(Pichia pastoris)是一种常用的重组蛋白表达系统,具有高效表达和正确折叠的特点。
它主要在大脑的特定区域表达,被认为可能作为大脑特异性的趋化因子或神经因子,调节免疫和神经细胞。
2× RNA上样缓冲液是一种专为RNA电泳设计的浓缩缓冲液,广泛用于变性和非变性RNA凝胶电泳。它能够帮助RNA样品在电泳过程中沉入凝胶孔中,并通过染料指示电泳进程。 组成成分 该缓冲液的主要成分包括: 甲酰胺:用于变性RNA,确保RNA在电泳中以单链形式迁移。 溴酚蓝和二甲苯青:作为电泳指示剂,分别指示约500个碱基和5000个碱基的RNA迁移速率。 EDTA:螯合金属离子,防止RNA降解。 使用方法 样品混合:将RNA样品与2× RNA上样缓冲液按等体积混合(例如5μL RNA样品+5μL缓冲液)。 变性处理:将混合后的样品在65-70℃加热5-10分钟,然后立即冰上冷却。 上样与电泳:将处理后的样品加入凝胶加样孔中,进行电泳。 优势 适用范围广:适用于总RNA、小RNA及特定RNA的电泳。 兼容性强:可用于变性或非变性的琼脂糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶电泳。 无RNase污染:确保RNA样品的完整性。 注意事项 避免RNase污染:使用无RNase的耗材,操作时戴口罩和手套。 分装保存:建议分装后保存于-20℃,避免反复冻融。 毒性防护:甲酰胺有毒性,操作时需做好防护。
这些变体不仅具有更高的耐热性,还能够适应不同的反应条件,满足各种实验需求。
核酸内切酶VIII(Endonuclease VIII,Endo VIII)是一种具有N-糖基化酶和AP-裂解酶活性的DNA损伤修复酶,广泛应用于基因损伤修复研究。其截短体则是通过基因工程改造,删除部分氨基酸序列而获得的变体,通常用于特定的研究目的,如提高酶的稳定性或特异性。 功能与特性 N-糖基化酶活性:识别并切除双链DNA上受损的嘧啶碱基,产生脱嘌呤(AP)位点。 AP-裂解酶活性:在AP位点的3'和5'端切割磷酸二酯键,产生具有3'和5'磷酸的碱基缺口。 高纯度与稳定性:核酸内切酶VIII截短体通过重组表达获得,纯度高,无核酸外切酶、核酸内切酶和RNase残留。 热失活:75℃孵育10分钟可使酶失活。 应用场景 DNA损伤修复研究:用于模拟和修复DNA损伤,特别是在氧化损伤研究中。 单细胞凝胶电泳(彗星试验):评估细胞内和体外的氧化DNA损伤。 NGS建库:在二代测序中,特异性切除含AP位点的模板链,实现双端测序。 酶法合成DNA:释放DNA链,用于合成特定的DNA结构。
Fast T4 DNA连接酶的反应条件经过优化,能够在短时间内实现高效连接。
在细胞内的RNA代谢过程中,核糖核酸酶R(RNase R)扮演着一个不可或缺的角色,它如同一位勤勉的“清道夫”,负责清理和降解各种RNA分子,维持细胞内RNA环境的整洁与稳定。 核糖核酸酶R是一种3' - 5'外切酶,主要作用于RNA分子的3'末端,逐步移除核苷酸。这种酶对RNA的降解具有广泛的底物特异性,能够处理多种类型的RNA,包括mRNA、rRNA、tRNA以及非编码RNA等。它的这种广泛作用能力使得它在细胞内RNA代谢的多个环节中都发挥着关键作用。 在细胞的生理过程中,RNase R的一个重要功能是参与细胞内RNA的降解和更新。细胞内的RNA分子在完成其功能后,需要被及时降解,以释放出核苷酸用于新的RNA合成。RNase R通过其3' - 5'外切酶活性,能够有效地降解这些不再需要的RNA分子,从而维持细胞内RNA水平的动态平衡。此外,RNase R还参与了细胞对环境应激的响应。在细胞面临氧化应激、营养缺乏等不利条件时,RNase R的活性可能会被调节,以加速某些RNA分子的降解,帮助细胞节省能量和资源,从而更好地适应环境变化。
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